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液相解决方案
饲料中L-肉碱的高效液相色谱(HPLC)检测方案
添加时间:2016-07-21 17:16:58 浏览量:250
旋肉碱(L-肉碱)又称肉毒碱,是一种水溶性氨基酸,由赖氨酸衍生而来。分子结构为L-γ-胺β-羟丁酸,分子式为 C7H16NO3,分子量为161.2。它是B族维生素类似物,曾被称为维生素BT。其分子结构中含有一个可供脂肪酸脂化的羟基,其饱和键有良好的水溶性和吸湿性,200℃以上它仍稳定存在,可在PH3~6的溶液中放置一年以上而不变坏。1998年我国卫生部将L-肉碱批准为食品添加剂,列入 营养强化剂类。我公司利用全新高性能LC-2010液相色谱仪,经实践检测饲料中L-肉碱的含量,得出的结果准确可靠,检出限好,适用于饲料中L-肉碱的测定,供广大用户参考。
以下是饲料中L-肉碱的详细检测方法。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
LC-2010液相色谱仪
色谱柱 C18 250mm×4.6mm×5μm
实验室常用仪器设备
超声波水浴
分析天平(感量0.001g)
0.45μm水性滤膜
1.2 试剂
异丙醇,色谱纯。
甲醇,色谱纯。
乙腈,色谱纯。
磷酸氢二钠。
磷酸二氢钾。
三乙醇胺。
柠檬酸。
氧化银。
肉碱衍生剂。
2 测定原理
样品经加乙醇超声提取后,然后加入肉碱衍生剂,将衍生物注入液相色谱反相柱上进行分离,用紫外检测器在210nm波长处定量测定。
3 试样溶液的制备
称 取5g试样于100ml烧杯中,加入30ml无水乙醇,溶解并转移至100ml容量瓶中,先后用10ml无水乙醇分3次洗涤烧杯,样液转移至100ml容 量瓶中,超声提取10min后用无水乙醇定容至刻度,混匀后于4000r/min离心5min。取上清液2ml,加入肉碱衍生剂0.25ml(衍生剂配制 方法:40 mg P-苯酰溴溶解于1.0 ml乙腈,加入百分之40 氢氧化四丁基铵50 μl),混合后置于60℃恒温水温箱120 min,吸取20 μl进样分析。
4 色谱条件
色谱柱:C18 柱 250mm×4.6mm×5μm;
流动相:甲醇:磷酸盐=5:95
流速:1.0mL/min;
温度:室温;
进样量:20μL;
检测波长:210nm。
典型谱图
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